domingo, 25 de noviembre de 2018

EJEMPLO DE ADN RECOMBINANTE NATURAL Y UN ARTIFICIAL DE EL ACV TIPO ISQUÉMICO.

El ADN se recombina de manera natural mediante procesos como la reproducción sexual, la transformación bacteriana y la infección viral. Artificialmente se usa en la regulación de la expresión génica, en la regulación de la producción comercial de síntesis de proteínas como la Insulina o la hormona del crecimiento, en el desarrollo de organismos transgénicos y en la amplificación del ADN.

ADN RECOMBINANTE NATURAL.

En la reproducción sexual se observa la recombinación del ADN durante la meiosis, en los cuales se entrecruza la información de los progenitores. Otro ejemplo de la recombinación natural del ADN es en las bacterias, mediante sus plásmidos intercambian ADN con otras bacterias para ganar resistencia ante muchos antimicrobianos. Un ejemplo: El activador plasminógeno de tejido recombinante (rt-PA) es una forma genéticamente elaborada de t-PA, una sustancia trombolítica fabricada naturalmente por el cuerpo. Puede ser eficaz si se administra intravenosamente dentro de las primeras 3 horas de la aparición de los síntomas del accidente cerebrovascular, pero debería utilizarse sólo después de que un médico ha confirmado que el paciente ha sufrido un accidente cerebrovascular isquémico. 


ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL.

El factor VII activo recombinante es un fármaco a considerar en situaciones de sangrado masivo. Los resultados mostraron que cada una de las tres dosis de rFVIIa evaluadas (40, 80 y 160 µg/kg), administradas en las primeras 4 horas de aparición de los síntomas, se asociaban con una reducción significativa en el crecimiento del hematoma .

La eritropoyetina humana recombinante (rHu-EPO) es uno de los diez productos más vendidos por la biotecnología mundial. El hecho de que la eritropoyetina se expresa en el cerebro y es regulada por el factor inducible por hipoxia-1 (HIF-1) [11, 33], el cual se activa por una amplia variedad de estresores, ha estimulado el desarrollo de estudios del efecto neuroprotector de la rHu-EPO en diferentes modelos de infarto cerebral.

En el caso del ictus isquémico, se ha diseñando el activador de plasminógeno de la sangre tPA llamado también alteplasa, que es una molécula que participa en el proceso de degradación de los coágulos de la sangre.




Los procesos que deben desarrollarse para obtener una proteína pura para uso farmacéutico son los siguientes
• Fermentación
• Eliminación de biomasa
• Concentración
• Purificación
• Acabado


REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA: 

http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0210-56912007000600007
https://espanol.ninds.nih.gov/trastornos/accidente_cerebrovascular.htm
http://www.acnweb.org/acta/2008_24_4_158.pdf
http://www.revespcardiol.org/es/ictus-diagnostico-tratamiento-las-enfermedades/articulo/13108281/
http://scielo.isciii.es/pdf/medinte/v32n9/puesta_al_dia.pdf
https://www.researchgate.net/profile/Francisco_Fernandez-Gomez/publication/23246046_Pharmacology_of_neuroprotection_in_acute_ischemic_stroke/links/0f3175320ededb7fe0000000.pdf

sábado, 17 de noviembre de 2018

Prueba Molecular diferente a PCR para ACV isquémico.

ACCIONES ANTI-INFLAMATORIAS DEL RECEPTOR NUCLEAR PPAR EN LA ISQUEMIA CEREBRAL: PAPEL DE LA 5-LIPOXIGENASA EN LA NEUROPROTECCIÓN POR ROSIGLITAZONA 


Hibridación.- valora la presencia de fragmentos con una secuencia de nucleótidos concreta. Incluye las técnicas de Western Blot.

Se usó Western Blot para determinar los niveles proteicos corticales de arginasa I, CD36, Ym1, PPARγ, iNOS, COX-2, TNFα y MMP9 y se emplearon homogenados cerebrales de ratas y ratones sacrificados 24h después de cirugía. Posteriormente, las membranas se incubaron con los correspondientes anticuerpos secundarios acoplados a peroxidasa de rábano conjugada a IgG con posterior exposición a reactivos de detección quimioluminiscentes. Las bandas inmunorreactivas se visualizaron utilizando software.


A nivel de proteína, estudiamos la expresión de 5-LO mediante western para comprobar si la inducción de 5-LO dependía de la actividad PPARγ, resultados indican que el infarto no produce variaciones en la expresión de 5-LO cerebral Por último, y con el objeto de localizar en qué tipo de células se expresa 5-LO, llevamos a cabo estudios de inmunofluorescencia de doble marcaje de 5- LO junto con marcadores de fenotipo celular en el tejido cerebral. El análisis microscopía confocal tras la inmunofluorescencia muestra 5-LO en las regiones corticales, definidas como áreas peri-infarto en isquemia, se producía fundamentalmente en citoplasma de neuronas. En concordancia con los resultados obtenidos por western blot, la intensidad de fluorescencia para la 5-LO neuronal se incrementaba en los animales isquémicos tratados con RSG y no se detectó expresión de 5-LO en astrocitos ni células mieloides.

Referencia bibliográfica: Iván Ballesteros. Universidad Complutense de Madrid. Facultad de Ciencias Médicas. Obtenido de: http://eprints.ucm.es/18006/1/T34191.pdf

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sábado, 10 de noviembre de 2018

PRUEBA DE PCR PARA LA ENFERMEDAD CEREBRO VASCULAR ISQUÉMICA



TEMA: Asociación genética de la variante RS12041331 del gen pear 1, con la hiperagregación plaquetaria en pacientes con enfermedad cerebrovascular isquémica.

OBJETIVO: Establecer la relación entre la variante RS12041331 del gen PEAR 1, la agregación plaquetaria y su posible influencia en la ECV isquémica y así poder establecer un protocolo de diagnóstico que facilite la detección temprana, que le permita al médico tomar medidas de pre-tratamiento y al paciente reevaluar sus hábitos de vida.

MUESTRA: Prueba de sangre.

ÁCIDO NUCLEICO: ADN HUMANO 
                                      ADN polimerasa

EXTRACCIÓN DE ÁCIDO NUCLEICO: LISIS
                                                                         CENTRIFUGACIÓN
                                                                         CROMATOGRAFÍA

GEN: PEAR 1   : 150 pb
           Serpina10: 128 pb

PCR: PCR-RFLP (Polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción)

Desnaturalización:  68-90 °C x 10-120 segundos.

Alineamiento:  37 - 65 °C  x10 a 120 segundos.

Replicación o Elongación: 75 y 90 °C x 3 minutos. 

En esta fase la Taq ADN polimerasa elonga los cebadores, empleando como molde ambas hebras originales. La replicación ocurre en dirección 3´-5´a partir del extremo 3´-OH de cada cebador, empleando como sustrato cuatro dNTPs, hasta terminar la lectura del molde o hasta comenzar un nuevo ciclo.

VISUALIZACIÓN: Electroforesis (EFO)

Resultado de imagen para PCR


REFERENCIA: 

Ing. biomédica. UCES.  Isaza. A. (Internet). Recuperado del sitio web: https://repository.eia.edu.co/bitstream/11190/2007/1/IsazaAlejandra_2015_AsociacionGeneticaVariante.pdf






domingo, 4 de noviembre de 2018

PRUEBA DE TAMIZAJE Y PRUEBA CONFIRMATORIA DE LA ACV ISQUÉMICA

Las pruebas de detección (tamizaje) tienen como objetivo principal buscar trastornos metabólicos, genéticos, permitiendo de esta forma tomar medidas antes de los síntomas. Estas enfermedades son poco frecuentes, pero tratables si se detectan a tiempo. Para la ECV las pruebas que se realizan son: la escala de Cincinnati y la escala de los ángeles, en el manejo prehospitalario, estas escalas son muy buenos predictores clínicos de ACV.

ESCALA DE CINCINNATI



















ESCALA DE LOS ÁNGELES



















PRUEBAS CONFIRMATORIAS: Tienen como objetivos determinar si has tenido un accidente cerebrovascular, qué tipo de ACV sufriste y qué lo causó, para ayudar al diagnóstico y tratamiento.

REFERENCIA:

Guía clínica AUGE, ACV Isquémico en personas mayores de 15 años (INTERNET). Recuperado de: https://www.minsal.cl/portal/url/item/7222754637e58646e04001011f014e64.pdf

Womens Health. Cómo se diagnostica el ACV isquémico. (INTERNET). Recuperado del sitio web: https://espanol.womenshealth.gov/heart-disease-and-stroke/stroke/stroke-treatment-and-recovery/how-stroke-diagnosed


Validación de prueba de tamizaje en el ACV agudo.(INTERNET).Recuperado del sitio web: http://bdigital.unal.edu.co/45813/1/05598729.2014.pdf