ACCIONES ANTI-INFLAMATORIAS DEL RECEPTOR NUCLEAR PPAR EN LA
ISQUEMIA CEREBRAL: PAPEL DE LA 5-LIPOXIGENASA EN LA NEUROPROTECCIÓN POR
ROSIGLITAZONA
Se usó Western Blot para determinar los niveles proteicos corticales de arginasa I, CD36, Ym1, PPARγ, iNOS, COX-2, TNFα y MMP9 y se emplearon homogenados cerebrales de ratas y ratones sacrificados 24h después de cirugía. Posteriormente, las membranas se incubaron con los correspondientes anticuerpos secundarios acoplados a peroxidasa de rábano conjugada a IgG con posterior exposición a reactivos de detección quimioluminiscentes. Las bandas inmunorreactivas se visualizaron utilizando software.
A nivel de proteína, estudiamos la expresión de 5-LO mediante western para comprobar si la inducción de 5-LO dependía de la actividad PPARγ, resultados indican que el infarto no produce variaciones en la expresión de 5-LO cerebral Por último, y con el objeto de localizar en qué tipo de células se expresa 5-LO, llevamos a cabo estudios de inmunofluorescencia de doble marcaje de 5- LO junto con marcadores de fenotipo celular en el tejido cerebral. El análisis microscopía confocal tras la inmunofluorescencia muestra 5-LO en las regiones corticales, definidas como áreas peri-infarto en isquemia, se producía fundamentalmente en citoplasma de neuronas. En concordancia con los resultados obtenidos por western blot, la intensidad de fluorescencia para la 5-LO neuronal se incrementaba en los animales isquémicos tratados con RSG y no se detectó expresión de 5-LO en astrocitos ni células mieloides.
Referencia bibliográfica: Iván Ballesteros. Universidad Complutense de Madrid. Facultad de Ciencias Médicas. Obtenido de: http://eprints.ucm.es/18006/1/T34191.pdf
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